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养好细胞注意点(三)

发布时间:2017-05-10      点击次数:1516

 (一)如何避免细胞污染

细胞污染的种类可分成细菌、真菌、霉菌、病毒等。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染的血清和污染的细胞等。严格无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好的细胞来源和培养基配制是减低污染的方法。

(二)支原体 (mycoplasma)污染的细胞, 对细胞培养有何影响

不能以肉眼观察出支原体污染异状。除极有经验的专家外,大多数遭受支原体污染的细胞株,无法以其外观分辨。

支原体污染几乎可影响所有细胞的生长参数,代谢及研究任一数据。故进行实验前,必须确认细胞为 mycoplasma-free,实验结果的数据方有意义。

(三)培养基保存于 4 ℃ 冰箱中,颜色会偏暗红色,且 pH 值会越来越偏碱性

培养基保存于 4 ℃ 冰箱中,培养基内的 CO2 会逐渐溢出,造成培养基越来越偏碱性,而培养基中的酸碱指示剂 (通常为 phenol red)的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱的结果,将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时,可以通入无菌过滤 CO2 ,以调整 pH 值。或酸碱调PH。

(四)L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗?它在溶液中不稳定吗?

L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后,L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解,L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成,而氨对于一些细胞具有毒性。

(五)什么培养基中可以省去加酚红?培养基中丙酮酸钠的作用是什么?

酚红在培养基中被用来作为 PH 值的指示剂:中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时,不使用加有酚红的培养基。

丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源,尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源,但是,如果没有葡萄糖的话,细胞也可以代谢丙酮酸钠。

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