ATCC细胞株解冻和培养操作

　　冻存的ATCC细胞株和杂交腐细胞株在运送过程中使用干冰保持低温。收到细胞后，可以立即解冻复苏，去除二甲基亚砜（DSMO0）后进行细胞培养。如果不立即复苏培养细胞，必须将细胞冻存管放置于液氮罐气相层储存。请不要将细胞存储在-130℃以上的温度。如果温度不够低，达不到-130℃，细胞活力会立即下降。

　　ATCC细胞株产品附带一份产品资料单，其中包含细胞株的信息和详细的操作指南。细胞株的所有详细介绍可以在ATCC找到 ，产品资料单也可以在ATCC下载。此外产品还附带细胞株具体生产批次的检测报告，其中包含批次的特定信息，如每只冻存管中细胞的数量，无微生物污染的检测结果等。

　　操作推荐

　　ATCC推荐在操作冻存的ATCC细胞株时使用手套，工作服和防护面具以避免任何事故发生。检查包装，查看是否有任何事破绽或渗漏。东侧的ATCC细胞株应处于固体状。

　　将冻存的ATCC细胞株从有干冰的包装中取出，理解复苏培养，或迅速转移放置在液氧罐气相层在——130°C以下的度存储。

　　1、 先准备好细胞培养皿或细胞株培养瓶，及产品说明推荐的相应细胞培养基。并在37°c水浴中预先温热细胞培养基

　　2、小心取出装有细胞的冻存管，保持管盖拧紧，将冻存管盖一下的部分置于37°C水浴中并轻微的搅拌以帮助解冻。解冻过程应该尽快，大约短于2分钟或待zui后一块小冰晶体刚融化，就应该将细胞冻存管取出水浴。

　　3、在从水浴中取出的细胞冻存管表面喷洒70%乙醇配制的消毒剂，用于菌纸巾或纱布试干。之后的操作步骤都应该遵循在无菌条件下生物安全柜中严格操作。

　　4、小心拧干冻存管的顶部，将管内容物用1MI移枪转移到9毫升培养基的无菌离心管中。离心5到7分钟（125*g）.小心吸去上清液以去除抗冻剂（二甲基亚砜），避免丢失细胞沉淀。将细胞沉淀重悬于配好的*培养基中。将细胞悬液转移到培养容器，轻轻摇晃使细胞均匀的分布。生长较慢的细胞株可重悬于5——8mI培养基并转移到T125培养瓶。生长较快的细胞株可重悬于12——20mI培养基并转移到T75培养瓶。

　　5、将细胞培养容器置于细胞培养箱，在温度37°C二氧化碳浓度5%的培养条件下进行卵育。细胞培养24小时候后应在显微镜下观察细胞株形态和生长状况 。