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黑色素瘤细胞株的传代培养

浏览次数:1045发布日期:2015-09-26
   黑色素瘤细胞株在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞株能继续生长,同时也将细胞株数量扩大,就必须进行传代(再培养)。传代培养也是一种将细胞株种保存下去的方法。同时也是利用培养黑色素瘤细胞株进行各种实验的必经过程。悬浮型黑色素瘤细胞株直接分瓶就可以,而贴壁细胞株需经消化后才能分瓶。一般使用蛋白水解酶(比如胰蛋白酶)消化贴壁细胞株成单个细胞株,也可加入乙二胺四乙酸(EDTA)提高消化能力,EDTA 是一种二价离子的螯合剂,能抑制黑色素瘤细胞株膜上的Ca2+和Mg2+。常用的细胞株消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA,一般用不含Ca2+和Mg2+的盐溶液配置,先用胰酶-EDTA 消化液清洗细胞株(5.0 -10.0 ml/75cm),然后弃去消化液,重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(2.0 to 5.0 ml/75 sq. cm flask) ,观察细胞株直到细胞株变圆脱离瓶壁,此过程一般需要5-15分钟,为了避免细胞株成团,消化黑色素瘤细胞株的过程中不要拍打细胞株瓶。对于特别难消化的细胞株,可以加入胰酶EDTA 消化液后把细胞株置于37°C 促进消化,细胞株脱离瓶壁后,立刻加入含有血清的完全培养基中止消化,血清中某些蛋白质能够抑制胰酶的活性。一般情况下,离心并不需要。如果黑色素瘤细胞株需要无血清或者低血清的培养基,可以以125000g 转速离心5分钟,然后弃去中止用的培养基,加入适合的新的培养基轻轻混匀细胞株,移入到新的培养瓶。传代的比例视细胞株类型而定,一般是1:2-1:20,具体比例可参考说明书。胰蛋白酶会对某些细胞株的黑色素瘤细胞株膜产生损伤,对于这种类型的细胞株,可用细胞株刮轻轻刮下细胞株,加入适量的培养基,轻轻吹打混匀细胞株,然后进行传代培养。
  为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑,考虑到培养黑色素瘤细胞株因传代而迟早会出现变异,有时因寄赠、交换和购买,培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室,zui佳的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊黑色素瘤细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(-70℃~-196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是:在-70℃以下时,细胞内的酶活性均己停止,即代谢处于完全停止状态,故可以长期保存。细胞低温保存的关键,在于通过0~20℃阶段的处理过程。在此温度范围内,水晶呈针状,极易招致细胞的严重损伤。
  传代黑色素瘤细胞株可提供复苏,冻存细胞,ATCC细胞。具体可根据科研人员要求决定。代做各种细胞服务。
  对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,吸的越干净越好,以免中和后加入的消化液,使强度减弱(或PBS洗1-3次)。50ml培养瓶加入消化液约1-3ml,按此比例进行消化,晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2-5分钟,镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落,加入2-3ml完全培养基后,轻轻吹打,使黑色素瘤细胞株基本成单个悬浮,然后分置其它无菌培养瓶内,加入完全培养基后继续培养或实验。
 
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