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黑色素瘤细胞株应谨慎对待

浏览次数:844发布日期:2015-07-26
   黑色素瘤细胞株是从一个经过生物学鉴定的细胞系或原代培养物用单细胞分离培养或通过筛选的方法,克隆具有特殊性质或标志的单细胞获得的细胞群,称细胞株。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。描述一个黑色素瘤细胞株时,必须说明它的特殊性质或标志。与细胞系类似,如果不能继续传代或传代代数有限,可称为“有限细胞株(finitecellstrain)”。如果可以连续传代,则可称为“连续细胞株(continouscellstrain)”。再由原细胞株进一步分离培养出与原株性状不同的细胞群,可称为亚株(substrain)。克隆(clone)则为黑色素瘤细胞株的一种特殊情况,指由一个细胞增殖所形成的群体。
 
  黑色素瘤细胞株是实验中非常常用的一个细胞株,在生物制药中使用也非常广泛。该细胞株培养条件简单,贴壁强度适中,比较容易转染,很适合用它来研究一般哺乳动物基因的功能。
 
  黑色素瘤细胞株对于更换培养基,应谨慎对待,更换培养基时,应留一瓶细胞使用推荐的培养基培养,留作种子。更换培养基有两种方法,zui简单的方法是直接更换培养基,强制使细胞适应新的培养基;还有一种更温和的方法:传代细胞的时候分成细胞两瓶,*瓶使用原来推荐的培养基,第二瓶使用50%原来推荐的培养基,50%新的培养基,之后仔细观察黑色素瘤细胞株的生长状态,如果第二瓶细胞生长状态不好,应立即停止更换培养基,如果第二瓶生长状态好,可以继续传代分瓶,一瓶使用50%原来推荐的培养基,50%新的培养基,另一瓶使用25%原来推荐的培养基,75%新的培养基,继续观察,如果细胞状态好,可以全部换成新鲜的培养基。
 
  黑色素瘤细胞株在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。一般使用蛋白水解酶(比如胰蛋白酶)消化贴壁细胞成单个黑色素瘤细胞株,也可加入乙二胺四乙酸(EDTA)提高消化能力,EDTA是一种二价离子的螯合剂,能抑制细胞膜上的Ca2+和Mg2+。常用的细胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03%(w/v)EDTA,一般用不含Ca2+和Mg2+的盐溶液配置,先用胰酶-EDTA消化液清洗细胞(5.0-10.0ml/75cm),然后弃去消化液,重新加入少量的胰酶-EDTA消化液(2.0to5.0ml/75sq.cmflask),观察细胞直到细胞变圆脱离瓶壁,此过程一般需要5-15分钟,为了避免细胞成团,消化细胞的过程中不要拍打细胞瓶。对于特别难消化的黑色素瘤细胞株,可以加入胰酶EDTA消化液后把细胞置于37°C促进消化,细胞脱离瓶壁后,立刻加入含有血清的完全培养基中止消化,血清中某些蛋白质能够抑制胰酶的活性。一般情况下,离心并不需要。如果细胞需要无血清或者低血清的培养基,可以以125000g转速离心5分钟,然后弃去中止用的培养基,加入适合的新的培养基轻轻混匀细胞,移入到新的培养瓶。传代的比例视细胞类型而定,一般是1:2-1:20,具体比例可参考说明书。胰蛋白酶会对某些黑色素瘤细胞株的细胞膜产生损伤,对于这种类型的细胞,可用细胞刮轻轻刮下细胞,加入适量的培养基,轻轻吹打混匀细胞,然后进行传代培养。
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