细胞房工作守则以及注意事项

细胞房工作守则及注意事项
一、 常规操作
    1. 穿着实验服。自己的白大衣或厚外套，可脱在门外的衣帽架上。
　　2. 穿着拖鞋。在缓冲间换下自己的鞋子，尽量避免在缓冲间走动、停留。
　　3. 细胞房zui多可4个人同时使用。尽量避免在内长时间逗留、交谈。
二、 培养箱使用规则
    1. 从培养箱取放物品前，用酒精清洁双手（或手套），尽量缩短开门时间和减少开门次数。
　　注： 培养箱中的空气是经过过滤的洁净空气。长时间敞开或频繁开关培养箱，容易造成污染。
　　2. 培养瓶皿放入培养箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精挥发后再放入，以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。
　　3. 2-3人共用一层培养箱，按预定位置摆放培养器皿，方便查找，以免长时间敞开培养箱。
　　4. 普通培养中的细胞，若非实验需要，每瓶/板细胞每天只需要观察生长状态一次，2人以上共用的细胞，可约好时间一起观察。
　　注：频繁将细胞拿出观察，容易给培养箱造成污染，同时也会影响细胞生长条件的恒定。
三、 显微镜使用规则
    1. 显微镜使用前，用酒精棉从中间至周围擦拭载物台。
　　2. 离开细胞房时或较长时间不需使用时，及时关上电源，延长灯泡寿命。尽量避免频繁开关显微镜电源。
四、 超净台相关操作规则
    1. 超净台使用遵循预约原则。无预约者若有必要在他人预约时段内使用，需先征得预约者的同意，否则应无条件让出工作台，以免耽误他人实验。
    2. 超净台使用前用紫外灯照射15分钟灭菌，使用前、后需用酒精棉球擦拭工作区消毒，所有物品放入超净台内使用前均应消毒。
    3. 点燃酒精灯前需检查瓶中酒精是否足够，液面应占瓶高1/3-2/3。
　　注： 消毒用75%的酒精，酒精灯用95%的酒精，向喷壶或灯内添加酒精时请留意。
　　注： 酒精和酒精棉球由值日生负责补给，发现细胞房内存放量不足时请及时通知值日生。
    4. 超净台中应摆放废液杯和废品杯各一只，用于暂时存放废弃物，实验结束后将杯内垃圾倒入水池或垃圾桶中，并冲洗晾干备用。
　　注： 将废弃的枪头、管子内的残留液体倒入废液杯后再弃入废品杯中，以免垃圾桶内留有大量培养液滋生细菌。
    5. 可回收的移液管、离心管、培养瓶皿等，放入装有清水的塑料桶中浸泡，桶内需有足量的清水以没过浸泡物品。
　　注： 可回收器皿必要时先初步涮洗后再放入桶内，尤其是培养瓶或血清管中有大量高营养的液体残留时，容易使桶内的清水长菌。
　　保证浸泡的瓶、管内*被清水充满，而不是在装有大量空气的情况下被压倒桶底。
　　塑料桶内物品由值日生每天负责送去清洗，使用者实验结束后若发现桶已装满，请通知值日生或顺手将塑料桶带出细胞房。
    6. 装培养液的瓶子、配培养液的器皿勿放入塑料桶内浸泡！应由使用者本人及时清洗晾干备用。
　　注： 因桶内物品通常要浸泡几小时以上才送去清洗，此时细菌可能已在桶中生长并释放内毒素。细菌内毒素很难通过常规湿热灭菌步骤去除干净，即使干烤也不能保证其*失活。内毒素对细胞生长及多种实验均有较大影响。
   洗涤程序：洗洁精洗净，清水冲十次以上去除洗涤剂残留，然后冲去离子水3次，再用双蒸水1次，倒置于器皿柜中晾干。关上器皿柜的门防尘。
五、 培养液、试剂等相关操作规则
    1. 从冰箱取放物品动作要迅速，关门时要检查门是否关好。按类别存放试剂。
    2. 培养液母液是公用，由值日生负责配制，长期存放于-20℃。使用时按比例加入血清配成培养液工作液，打开使用后的母液存放于4℃，要注意避免污染。发现4℃存放的培养液量不足时及时从-20℃中预解冻，若-20℃中已没有储备，请及时通知值日生。
　　3. 分装好的血清长时间保存于-20℃，使用前放于4℃预解冻。从-20℃取用血清者需登记，并在血清管上签上使用者名字，若使用别人解冻的血清需征得同意以免耽误他人实验。按需解冻，避免反复冻融。
　　4. 原则上解冻好的血清应全部配成含血清的培养基备用，若有剩余，则暂存于4℃并尽快使用。尽量不要使用他人开过的血清，以免交叉污染。
六、 值日生工作职责
    1. 每周值日生时间从周六开始，至下周五结束。
　　2. 值日周开始时需做的事情：在周六、日或之前准备好灭菌的枪头、离心管、干烤好的玻璃器皿，供未来一周的使用。配制消毒用的75%的酒精，制作酒精棉球，给细胞房内添加足够的95%乙醇供酒精灯使用。
　　注： 新离心管灭菌前，先用去离子水过2-3次，再用双蒸水冲1次，烘干后用牛皮纸包好、灭菌。
　　注：75%的酒精可用750ml 95%的酒精加去离子水至950ml配制而成。
　　3. 值日周内每天需做的事情：开大紫外灯消毒细胞房15-30min；将装满浸泡物品的塑料桶拎出细胞房送洗，并将空桶放回细胞房；更换垃圾袋；检查培养箱内水量是否足够；检查灭菌物品的储备情况，以便及时补充；检查培养液母液、血清、酒精等公用试剂的储备情况。
　　4. 值日周结束前需完成的事情：星期五或前后一天内打扫细胞房。包括拖地，擦桌子、吊柜、清洁和整理抽屉，擦超净台、冰箱及桌上的仪器，给水浴锅加水或换水，洗细胞房的实验服和拖鞋，紫外消毒细胞房。切记给培养箱换MilliQ水，保证水质清洁！
　　注：若上周值日生及时给培养箱内水槽加足水，根据经验未来一周内培养箱不会干水，但值日生仍应经常检查，以便及时发现异常情况。
　　5. 每2周清洁一次培养箱：先将培养箱中的物品取出暂存于超净台内，对于比较敏感的细胞可以暂存于404细胞房的培养箱；将培养箱内的不锈钢板取出，包括4块横板和左右2块立着的架子，用酒精棉球清洁钢板和培养箱内壁；打开培养箱清洁内壁时动作要迅速，避免长时间敞开门使得大量不洁净空气进入，缩短过滤器的寿命；用紫外灯照射培养箱内部15min，手提紫外灯放入培养箱前要用酒精棉擦拭干净。
　　6. 配制培养液母液：培养液有RPMI1640和DMEM两种，配方见404公共配液房；配制培养基要提前干烤量筒、烧杯、250ml血清瓶，湿热灭菌滤器、血清瓶瓶盖，国产滤膜使用前用MilliQ水浸泡15min以上或过一晚。
七、常用溶液的配制
    1. RPMI 1640：干粉一包，碳酸氢钠 2.0g，Hepes 2.38g，青霉素100u/ml，链霉素100ug/ml，搅拌1-2小时后调节pH值至7.2，定容至1L，过滤灭菌分装；
　　2. DMEM：干粉一包，碳酸氢钠 3.7g，Hepes 2.38g，丙酮酸钠110mg，青霉素100u/ml，链霉素100ug/ml，搅拌1-2小时后调节pH值至7.2，定容至1L，过滤灭菌分装；
　　3. 胰蛋白酶：用D-Hanks配制，浓度为0.25％(W/V), 搅拌2小时后调节pH值至7.2，定容至1L，过滤灭菌分装；
　　4. 青霉素：80万单位/瓶，加入4ml PBS，配成浓度为200000U/ml的母液；
　　5. 链霉素：按质量体积比配制，用PBS配成浓度为200mg/ml的母液。