ATCC细胞株在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。ATCC细胞株一般使用蛋白水解酶（比如胰蛋白酶）消化贴壁细胞成单个细胞，也可加入乙二胺四乙酸（EDTA）提高消化能力，EDTA 是一种二价离子的螯合剂，能抑制细胞膜上的Ca2+和Mg2+。常用的细胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA，一般用不含Ca2+和Mg2+的盐溶液配置，先用胰酶-EDTA 消化液清洗细胞（5.0 -10.0 ml/75cm），然后弃去消化液，重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(2.0 to 5.0 ml/75 sq. cm flask) ，观察ATCC细胞株直到细胞变圆脱离瓶壁，此过程一般需要5-15分钟，为了避免细胞成团，消化细胞的过程中不要拍打细胞瓶。对于特别难消化的细胞，可以加入胰酶EDTA 消化液后把细胞置于37°C 促进消化，ATCC细胞株脱离瓶壁后，立刻加入含有血清的*培养基中止消化，血清中某些蛋白质能够抑制胰酶的活性。一般情况下，离心并不需要。如果细胞需要无血清或者低血清的培养基，可以以125000g 转速离心5分钟，然后弃去中止用的培养基，加入适合的新的培养基轻轻混匀细胞，移入到新的培养瓶。传代的比例视细胞类型而定，
ATCC细胞株一般是1:2-1:20，具体比例可参考说明书。胰蛋白酶会对某些细胞的细胞膜产生损伤，对于这种类型的细胞，可用细胞刮轻轻刮下细胞，加入适量的培养基，轻轻吹打混匀细胞，然后进行传代培养。
ATCC细胞株的污染鉴定、预防和处理问题。
普通微生物污染：培养基浑浊，高倍镜观察有微生物污染；按规定弃用并全面严格灭菌。
支原体污染：显微镜无法观察，依经验表现为细胞生长缓慢，有细胞漂浮等等，应通过PCR 等方法鉴定，如发现支原体污染，ATCC细胞株应按规定弃用，实验室要及时全面消毒灭菌，防止蔓延。（有些常规性细胞学实验不受支原体污染影响，可以继续使用细胞传代，为防污染扩大蔓延，可以选择性的在培养基中加入价的其它种抗生素，并在隔离实验室操作和独立使用一切用具与培养基等）。
了解每株ATCC细胞株可能产生的生物危害是很难的，但是强烈推荐，所有的人类和其他灵长类生物的细胞在能否预防HIV和肝炎病毒的实验条件下操作，所有的操作必须在垂直层流超净台内操作（推荐生物安全柜），操作过程中产生的废液和废仪器都要经过清洗、酸处理等处理后才能丢弃。
