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上皮细胞的培养方法

发布时间:2012-10-11      点击次数:1574

上皮细胞的培养方法

 


上皮细胞的培养方法

 

 

上皮细胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分,又由于癌起源于上皮组织,故上皮细胞培养特别受到重视.但上皮细胞培养中常混杂有成纤维细胞,培养时生长速度往往超过上皮细胞,并难以纯化,同时上皮细胞难以在体外长期生存,因此纯化和延长生存时间是培养关键.
体内上皮细胞生长在胶原构成的基膜,因此培养在有胶原的底物上可能利于生长,另外人或小鼠表皮细胞培养在以3T3细胞为饲养层(用射线照射后)时,细胞易生长并可发生一定程度的分化现象.降低PH、Ca2+含量和温度,向培养基中加入表皮生长因子,均有利于表皮细胞生长.
以表皮细胞为例,用皮肤表皮和分离培养法可获得纯上皮细胞,其法如下(黑木凳志夫 1981)
1、取材:外科植皮或手术残余皮肤小块,早产流产儿皮肤更好,取角化层薄者,切成0.5-1平方厘米小块.
2、置0.02%EDTA中,室温,5分钟.
3、换入0.25%胰蛋白酶中,4℃过夜.
4、分离:取出皮块,用血管钳或镊子将表皮与层分开.
5、取出表皮,剪成更小的块后,置0.25%胰酶中,37℃,30—60分钟.
6、反复吹打,制成悬液.
7、培养:用80目不锈钢纱网滤过后,低速离心,吸去上清.
8、直接加入培养基(Eagle加20%小牛血清)制成细胞悬液,接种入培养瓶,CO2温箱培养.
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