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担心细胞污染? 一起来和小编学习这些防治小措施吧
点击次数:162 发布时间:2019-04-25
   担心细胞污染? 一起来和小编学习这些防治小措施吧
  很多求助细胞的小伙伴培养细胞时间都不长,部分小伙伴甚至没有经过系统的培训,仅靠课本知识和少量的指导就开始尝试细胞培养,在学习过程中难免走不少弯路,常见的便是细胞污染。现在就如何防治细胞污染做个介绍,希望能帮到各位小伙伴。
  无论新人还是熟手,细胞污染都是必须要面对的,那对于细胞污染,预防为主,因为细胞一旦污染,想救是非常困难的,污染严重的话即便救活,细胞状态也会差很多。所以先来说下怎么预防细胞污染的。
  生物安全柜是处理细胞的主要场所,也是细胞发生污染的主要场所,所以安全柜的正确使用是预防细胞污染的第一步。那么安全柜内需要注意的小细节有哪些呢?
  首先,所有进入安全柜的东西在进入前都要用75%的酒精消毒。特别要注意的是我们的手,只要出了安全柜,再进入安全柜前都要喷75%的酒精消毒。实验耗材尽量放置在合适的容器内用报纸包好后灭菌,如枪头插入枪头盒,其他不规则的耗材可放入铝制饭盒内。枪头插入枪头盒时要带手套,因为灭菌可能无法去除枪头上可能粘附的油脂或其他杂质。
  其次,安全柜内的东西要摆放有序,这个可以根据个人使用习惯而定(如果小伙伴使用的是公用安全柜,则可能需要使用前临时调整)。
  再次,由于使用安全柜的过程中手和前臂都是要进入安全柜的,所以有条件的小伙伴应该准备至少一件细胞房专用连体洁净服(装入布袋消毒后烘干,在细胞房中取出,非更换前不得穿出细胞房),没有条件的小伙伴则至少准备一副套袖,每次用完后放安全柜中紫外消毒。
  细胞培养离不开各种试剂,诸如培养基、血清等,所以预防细胞污染的第二步就是正确处理和使用这些试剂。如果实验室条件允许,那么保险的莫过于直接都买商业化试剂,例如比较知名的Gibco、Hyclone等,这些品牌的试剂只要是正品,品质都没有问题。当然对于一些学校,特别是条件相对艰苦的实验室,可能需要自己买干粉配制,那么在试剂配制中的无菌操作就格外重要。另外建议每次试剂配制量不宜过多,比如培养基以1-2周内用完为宜,另分装成小瓶时可考虑再用针头滤器过滤一次,减少细菌污染的可能性。
  在准备工作一切就绪后,细胞的处理过程也是大家需要注意的。细胞处理前应将当次实验需要的各种试剂、耗材准备齐备,尽量减少细胞处理过程中的来回走动。安全柜使用前紫外照射30min灭菌,然后通风5min保证换气到位。实验过程中,所有试剂不用就盖上瓶盖,如果需要打开瓶盖,则除了干净的枪头,其他任何东西都不要从瓶口的正上方经过,防止试剂污染。细胞培养若使用培养皿,则最好不要长时间打开皿盖。另外移液器也是细胞污染的一个隐藏途径,特别是使用无滤芯枪头的小伙伴,在吸取试剂时,很容易不小心将试剂倒吸入移液器,如果发生这种情况,要及时用酒精棉球擦去倒吸的试剂,特别是培养基,极易成为细菌生长的温床。一把污染的移液器可以轻松污染小伙伴的所有细胞,甚至整个实验室的细胞,所以友情推荐有条件的小伙伴在处理细胞时一定要使用带滤芯的枪头。当然即便是使用带滤芯的枪头,也要尽量避免试剂倒吸,因为想要彻底去除倒吸入移液器的试剂非常困难。
  培养箱作为细胞培养的场所,也需要小伙伴留心。由于培养箱内的温度和湿度很高,是很适宜细菌生长的,所以如果有条件(实验室有2个或以上培养箱),最好定期用75%酒精擦拭培养箱,及时定期更换培养箱内水槽。
  那么细胞如果还是不幸污染了,那又该怎么办呢?我把细胞污染分为早期和晚期两种。早期污染是细胞状态变差,但依旧能保持生长,显微镜下(光镜)不可见明显微生物或可见少量微生物,这时候我们在换液时建议多用PBS洗几次,然后用双抗原液侵润细胞1-2min,吸去,再加入正常培养基。早期污染只要发现及时,处理得当,救回来的可能性还是很大的。晚期污染则是细胞形态发生明显改变,细胞停止生长,显微镜下可见明显微生物。这时候我建议大家及时清理掉相关细胞,以免污染其他细胞,重新复苏更早批次的细胞。所以大家会发现,新细胞收到后,不应急于开展实验,而应该先小心培养,冻存1到2个批次的早期细胞,然后再开展实验,这样实验细胞一旦出现问题,可以有库存细胞保证实验还能继续进行。
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