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白血病细胞株的冻存及复苏

浏览次数:855发布日期:2016-12-24
     白血病细胞株通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物的培养物也就是说,它是用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。
    白血病细胞株的冻存及复苏:
    白血病细胞株的冻存:为避免污染造成的损失,zui小化连续细胞系的遗传改变和避免有限细胞系的老化和转化,需要冻存哺乳细胞。冻存细胞前,细胞应该特性化并检查是否污染。
    有几种普通培养基用来冻存细胞。对于包含有血清的培养基,成分可能如下:
    ◆包含10%甘油的完全培养基,
    ◆包含10%二甲基亚砜(DMSO)的完全培养基,
    ◆50%细胞条件培养基和50%含有10%甘油的新鲜培养基,或
    ◆50%细胞条件培养基和50%含有10%二甲基亚砜的新鲜培养基。
    对于无血清培养基,一些普通的培养基成分可能是:
    ◆50%细胞条件无血清培养基和50%包含有7.5%二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基,或
    ◆包含有7.5%二甲基亚砜和10%细胞培养级BSA的新鲜无血清培养基。
    1.悬浮细胞
    ●计数将要冻存的活细胞。细胞应该处于对数生长期。以大约200~400g离心5分钟沉淀细胞,使用移液管移去上清到zui小体积,不要搅乱细胞。
    ●以1×107到5×107细胞/ml密度,在包含有血清的冷冻培养基中再次悬浮细胞,或者以0.5×107到1×107在无血清培养基中,再次悬浮细胞。
    ●分装进冻存管,将冻存管置于湿冰上或放入4℃冰箱中,5分钟内开始冷冻步骤。
    ●细胞以1℃/分钟进行冷冻,可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-70℃到-90℃的冰箱中,然后转移到液氮中贮存。
    2.贴壁细胞
    ●使用分离试剂从基层分离细胞,分离时尽可能温和,使对细胞的损伤减少到zui小。
    ●在完全生长培养基中,再次悬浮分离细胞,确定有活力细胞数。
    ●以大约200g离心5分钟沉淀细胞。使用移液管移去上清到zui小体积,不要搅乱细胞。
    ●以5×106到1×106细胞/ml密度,在冻存液中悬浮细胞。
    ●分装进冻存管,将冻存管置于湿的冰上或放入4℃冰箱中,5分钟内开始冷冻步骤。
    ●细胞以1℃/分钟进行冷冻,可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-70℃到-90℃的冰箱中,然后转移到液氮中贮存。
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