关于厌氧菌的甘油保藏方法

厌氧菌的甘油保藏方法： 

1、 厌氧甘油的制备： 厌氧瓶或厌氧管中放置一定量的甘油，甘油的量根据需要加入，不要多加，因为厌氧甘油制备好以后不能反复灭菌，反复灭菌甘油会变性而呈黄色，且有一股芳香味道。加入终浓度为0.04 %的 L-cysteine和 1 %的5 %的 N2S母液。往厌氧瓶中通N2，通气时间和配制培养基时时间相同。盖上塞子和盖子。121 ℃， 20 min 灭菌后备用。 

2、 取新鲜菌液（对数期），在通N2 的情况下，用针筒和针头往有菌液的厌氧管中加入终浓度为15-20 %的厌氧甘油，再通一会N2，目的是赶走在转移甘油过程中带进去的O2。盖上塞子和盖子，混匀，冻于-80 ℃。 

3、 活化：用针头和针头吸取一定甘油保藏的菌液，加到培养基当中，加的量一般要多于1 %，因为厌氧菌的生物量比较小，一般2到5 %左右。目测加完甘油菌液的培养基是否浑浊，并作记录。如果加入的菌液太多，造成一开始培养基就比较浑浊，会干扰我们对菌是否生长的判断，而且甘油太多也会抑制菌的生长。