您好,欢迎进入上海复祥生物科技有限公司网站!
全国服务热线:15000266580
上海复祥生物科技有限公司
产品搜索
PRODUCT SEARCH
产品分类
PRODUCT CLASSIFICATION
您现在的位置:首页 > 技术文章 > 细胞培养的成功因素之一细胞消化

细胞培养的成功因素之一细胞消化

浏览次数:1262发布日期:2016-08-26

1. 绝大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可。去胰酶后,残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2min足够消化细胞。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞,连续这样传代,对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去,胰酶润洗吸去,然后37℃消化。比较难消化的细胞(润洗方法5min还不能消化),这样的细胞一般需要用少量胰酶孵育。


2.细胞如何算是消化好了呢?不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了,一般你肉眼观察贴壁细胞层,只要能移动了,多半呈沙壮移动,其实已经可以了,很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞,这是没有必要的。一般能移动了,说明细胞与培养基质材料的附着已经消失了,细胞之间的附着也已经消失了,细胞已经独立分布了(虽然没有呈现很广的离散分布)。这个时候应该停止消化,不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好,间隙很大,才停止。细胞就是完全成单个细胞悬液,之后在贴壁的过程中仍然会聚集,这个是贴壁培养的细胞,尤其是肿瘤细胞的一个特性。如果和标准形态不一致,那可能是自己没消化好导致的,但如果消化方法正确,仍然成片分布,甚至完全吹打成单细胞悬液,贴壁后仍然成片分布,这是细胞的特性,是因为贴壁过程中重新聚集了。这个时候你拼了命要去让它均匀分布,你的细胞之后会对你越来越不好。


3.EDTA的作用。胰酶切割ECM的一些负责粘连和附着的蛋白,而EDTA通过螯合Ca离子,作用于Integrin的活性,所以EDTA的作用更加温和。有的人在胰酶里添加一些EDTA,或者对付特别难消化的细胞,添加多一些EDTA

4.PBS洗涤。消化之前用PBS洗涤,是常见的操作,因为血清中含有抑制胰酶的蛋白。对于一些难消化细胞,那么可以配制不含CaMg离子的PBS,因为这些离子也会抑制胰酶的活性。但对于绝大部分胰酶或者EDTA溶液润洗即可消化的细胞,不需要配制如此溶液。

Contact Us
  • 联系QQ:316826860/1784382136/1784382138
  • 联系邮箱:xiangfbio@163.com
  • 传真:021-35080520
  • 联系地址:上海市虹口区赤峰路630弄南雁大厦

扫一扫  微信咨询

©2020 上海复祥生物科技有限公司 版权所有  备案号:沪ICP备10013034号-2   技术支持:化工仪器网    GoogleSitemap    总访问量:178439 管理登陆